Teoria do Teste ELISA

Os testes ELISA competitivo direto da Neogen operam com base na competição entre o conjugado de enzima peroxidase de rábano (HRP) e o analito na amostra para sítios de ligação específicos nos micropoços revestidos com anticorpos.

Procedimento do Teste ELISA

Amostras, padrões ou calibradores são primeiramente adicionados aos micropoços revestidos com anticorpos. Em seguida, o conjugado enzimático é adicionado e a mistura é incubada à temperatura ambiente. Durante a incubação, ocorre a competição pelos sítios de ligação nos micropoços. A placa contendo os micropoços é lavada, removendo todo o material não ligado. O conjugado enzimático ligado é detectado através da adição do substrato TMB.

Os resultados do teste ELISA podem ser obtidos através da medição e comparação entre a leitura de absorbância dos micropoços contendo as amostras e os padrões, utilizando-se um leitor de micropoços a 650 nm ou 450 nm se uma solução ácida stop for utilizada. A extensão do desenvolvimento da cor é inversamente proporcional à quantidade de analito na amostra ou padrão. Por exemplo, a ausência do analito na amostra resultará em uma cor azul escura, enquanto que a presença do analito resultará em uma cor azul claro ou ausência de cor à medida que a concentração do analito aumenta. Se a solução ácida stop for utilizada para cessar a reação, a cor azul escuro irá tornar-se amarelo escuro e o azul claro ou incolor mudará para amarelo claro ou incolor.

Procedimento do Princípio de Teste ELISA

Os micropoços estão revestidos com anticorpos e prontos para a utilização.
NÃO LAVE
Uma amostra ou controle é adicionado em cada micropoço. Em seguida, o conjugado enzimático é adicionado e a mistura é incubada à temperatura ambiente.
Lave o micropoço para remover todo o material não ligado.
O material ligado permanece no micropoço.
Adicione o substrato TMB em cada micropoço e aguarde o desenvolvimento da cor.
Os resultados qualitativos são obtidos medindo-se a leitura de absorbância a 650 nM ou 450 nm se for utilizada a solução ácida stop.