Os seguintes são exemplos comuns de resultados inesperados ao executar os kits ELISA da Neogen com possíveis explicações.

  1. Desenvolvimento extremo da cor azul escuro com amostras e padrões.
    1. A placa não foi devidamente lavada (3 x 300 µL) com a solução tampão de lavagem. Se estiver utilizando um lavador automatizado, verifique se a máquina está funcionando corretamente e aumente o ciclo de lavagem para 5 x 300 µL.
    2. O concentrado de conjugado enzimático foi diluído incorretamente.

  2. Desenvolvimento extremamente baixo da cor com amostras e padrões.
    1. O tampão de lavagem não foi diluído corretamente antes da utilização.
    2. Água de baixa qualidade foi utilizada para diluir o tampão de lavagem. Água deionizada deve ser utilizada para as diluições.
    3. O concentrado de conjugado enzimático foi diluído incorretamente.
    4. O kit deteriorou prematuramente devido às condições adversas de transporte e armazenamento. Investigue a condição do kit quando este for recebido e como foi armazenado antes do uso. As condições apropriadas de armazenamento estão listadas no manual de instruções.
    5. O kit está fora da validade. Verifique a data de validade do kit de teste e reagentes. Nenhum componente do kit deve ser utilizado após a data de validade. Não misture reagentes ou outro componente de um kit com reagentes ou componentes de um kit diferente.
    6. Contaminação. Sempre utilize técnicas assépticas ao abrir e remover os reagentes dos frascos. Mantenha a placa coberta, exceto quando estiver adicionando os reagentes, durante a lavagem ou leitura. Sempre utilize ponteiras diferentes para cada reagente. Quando estiver pipetando, não deixe que a ponteira entre em contato com qualquer reagente que já esteja no micropoço.

  3. Nenhum desenvolvimento da cor com amostras e padrões.
    1. Diluição inadequada do concentrado de conjugado enzimático.
    2. O kit está fora da validade. Verifique a data de validade do kit de teste e reagentes. Nenhum componente do kit deve ser utilizado após a data de validade. Não misture reagentes ou outro componente de um kit com reagentes ou componentes de um kit diferente.
    3. Adição incorreta dos reagentes. Reveja o procedimento do teste.

  4. Pouco ou nenhum deslocamento com a curva padrão.
    1. Diluição incorreta dos padrões. Consulte o sistema de diluição dos padrões no manual de instruções.
    2. Contaminação.
    3. A placa não foi devidamente lavada (3 x 300 µL) com a solução tampão de lavagem. Se estiver utilizando um lavador automatizado, garanta que a máquina esteja funcionando corretamente e aumente o ciclo de lavagem para 5 x 300 µL.
    4. O padrão deteriorou prematuramente. Contate o seu representante da Neogen Corporation e forneça o nome do kit, número do lote, data de validade e as leituras de densidade óptica para uma investigação mais detalhada.

  5. Desempenho correto da curva padrão, porém as amostras conhecidas como negativas apresentaram um baixo desenvolvimento da cor.
    1. As amostras precisam ser diluídas ou extraídas para eliminar interferências. Refira-se ao procedimento de extração fornecido no manual de instruções do kit.

  6. Desempenho correto da curva padrão, porém as amostras extraídas apresentaram um baixo desenvolvimento da cor.
    1. A concentração do analito na amostra extraída é muito alta. A amostra extraída precisará ser diluída antes de ser analisada para que a leitura da DO se enquadre na curva padrão. Quando se utiliza uma diluição, a concentração determinada a partir da curva padrão deve ser multiplicada pelo fator de diluição.
    2. Extração inadequada da amostra resultando na presença de um solvente. Refira-se ao procedimento de extração recomendado no manual de instruções.

  7. Variabilidade com duplicatas.
    1. Técnica inconsistente e/ou inadequada de pipetagem ao adicionar os reagentes. Aprimore a técnica de pipetagem.
    2. Lavagem inconsistente. Os micropoços devem ser lavados 3 x 300 µL com a solução de lavagem diluída. Se estiver utilizando um lavador automatizado, garanta que a máquina esteja funcionando corretamente e aumente o ciclo de lavagem para 5 x 300 µL.
    3. Aspiração inadequada durante a lavagem. Os micropoços devem ser esvaziados entre as lavagens. O conteúdo dos micropoços devem ser despejados e os micropoços batidos contra uma superfície para remover qualquer resíduo entre as lavagens. Remova qualquer excesso de líquido nos micropoços antes de adicionar o substrato. Adicione o substrato imediatamente após a remoção da solução de lavagem. Se estiver utilizando um lavador automatizado, garante que a máquina esteja aspirando corretamente.
    4. Interrupção durante a preparação do teste. Todos os reagentes devem ser preparados antes da inicialização do teste. A adição do reagente deve ser realizada de forma oportuna e precisa.

Se você obtiver um resultado que não foi abordado aqui, favor entrar em contato com o nosso Departamento de Serviço para assistência.

Neogen Corporation
Life Sciences, Toxicology
944 Nandino Boulevard
Lexington, KY 40511 USA
+1 800/477-8201 (USA/Canada)
+1 859/254-1221
Email: techservice-lifesciences@neogen.com

 

Reposição/Política de Crédito

A Neogen Corporation terá todo o prazer em repor ou emitir um crédito para qualquer kit defeituoso. Solicitamos uma cópia dos valores de absorbância, tabela correspondente e o número do lote do kit em questão, para determinar a causa do problema.